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脂质体转染原理和步骤详解
来源于:上海联硕生物科技有限公司,浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2022/2/18 8:43:00

1、细胞传代

1)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。

2)用移液枪加入1ml胰酶,消化1min(37℃,5% CO2)。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

3)加入1ml的含血清培养基终止反应。

4)用移液枪多次吹吸,使细胞完全分散开。

5)将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。

6)用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8 x 106个细胞加入一个35mm培养皿。

7)将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。

8)将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。

2、细胞转染

1)转染试剂的准备

A、将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10s,溶解脂状物。

B、震荡后将试剂放在-20℃保存,使用前还需震荡。

2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积ul:DNA质量ug)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。

3)将混合液在室温放置10-15min。

4)吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。

5)加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。

6)到时间后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养继续培养24-48h。

3、第二次细胞传代

1)在转染后24h,观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

2)再次进行细胞传代,按照免疫染色合适的密度0.8 x 105个细胞/35mm培养皿将细胞重新分入培养皿中。

3)在正常条件下培养24h后,按照染色要求条件固定。

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